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治疗性抗体 · 新型疫苗 · 试剂和原料

rProtein A Resin

Q:基质

A:4%交联琼脂糖凝胶


Q:配基

A:重组Protein A


Q:配基密度

A:6mg重组蛋白A/ml


Q:动态吸附载量

A:60mg 人IgG/ml


Q:颗粒大小

A:50-160um


Q:推荐流速

A:50-300cm/h


Q:PH范围

A:2--13


Q:使用温度

A:4°或者常温


Q:Protein A Sepharose层析操作步骤

A:装柱、?#33014;狻?#19978;样、洗?#21360;?#27927;?#36873;?#20877;生


Q:如何?#33014;?/span>

A:用5-10柱体积的?#33014;?#32531;冲?#28023;?0mM PBS,PH7.4)?#33014;?#23618;析柱,至流出液电导和PH与?#33014;?#28082;一?#38534;?


Q:某些载量较少抗体如何纯化

A:可以?#23454;?#35843;高?#33014;?#32531;冲液中的?#38395;?#24230;(最高达3M)和PH值(最高达8.2),来增强抗体与介质的吸附结合力。但有时过高的PH值会增加杂蛋白的吸附,因此应用时需根据?#23548;?#24773;况?#23454;?#35843;节。上述的缓冲液在使?#20204;?#20808;用0.45um滤膜过滤。


Q:上样

A:样品缓冲液应尽可能与?#33014;?#28082;一?#38534;?#22266;体样品可用?#33014;?#28082;溶解配置;?#22242;?#24230;样品溶液可用?#33014;庖和?#26512;;高浓度样品溶液可用?#33014;?#28082;稀释;如果上样体积过大,可以采取调节上样液PH和?#38395;?#24230;的方式使样品的PH和电导与?#33014;庖航?#36817;。为了避免堵塞层析柱,样品应经离心或0.45um滤膜过滤处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。


Q:洗涤

A:上样完毕后继续用?#33014;?#32531;冲液洗至基线


Q:洗脱

A:用洗脱缓冲液洗脱(0.1M柠檬酸pH3.0;或0.1M甘氨酸pH3.0;具体洗脱条件与抗体的结合强度和稳定性密切相关,效果?#32531;?#26102;应进行洗脱缓冲液的优化),收集洗脱液。洗脱后,应立刻用碱性缓冲?#28023;?#22914;1M Tris-HCl,pH9.0)将收集到的抗体溶液中和到抗体稳定的pH,避免抗体失活,维持抗体的生物活性。


Q:在位清洗

A:介质使用后,需要对介质进?#24615;?#20301;清洗。
用0.1M NaOH清洗柱子3-5柱体积,并用5~10柱体积的纯水冲洗,然后用缓冲液吸到中性?#32431;?#37325;复使用。如不立即重复使用,把柱子保存在20%乙醇的PBS?#23567;?



Q:如何再生

A:该重组Protein A对碱耐受,可以用0.1M NaOH洗涤再生




Q:Protein A可以重复用多少次

A:50?#25105;?#19978;



Q:结合力不高,样本为腹水

A:1、假定是单抗腹水,建议按照以下方法处理:硫酸铵沉淀(注意调节pH为7.0,这个很重要,我们的柱子pH5就可以洗脱,无需中和,防止变性);上柱;然后洗脱;最后100mM NaOH重生。
   2、proteinA对某些单抗亚型的亲和能力低,不如protein L,我们自己已经纯化了100多株单抗,其中30%左右的单抗proteinA不挂或者很低,但是proteinL表现很好。
建议,同步测试protieinL。

   另外,我们的proteinA是新型配基,载量测定是用人血清测试,?#39063;?#27425;都在30mg/mL 以上,这一点,客户都可以自测,它另外具有的突出优势是:pH4.5就可以洗脱,防止蛋白变性,便于下游处理(例如50mM 醋酸钠缓冲?#28023;琾H4.5.)


Q:是否可除血清中血细胞杂质

A:可清楚血清中血细胞杂质。同时推荐样品在纯化前高速离心,去除大部分固体杂质。


Q:做小鼠载量分别是多少

A:亚型不同,鼠的载量是人载量的20%-50%左右,做小鼠建议用Protein G,这个是通用的


Q:纯化不同动物、不同亚型抗体时所用?#33014;?#32531;冲液是否一样?若不一样配方?

A:不同动物、抗体亚型用的缓冲液是一样的,只是不同的动物来源、不同的抗体亚型载量会不一样。


Q:1ml大约可以提纯多少的血清?需要粗提纯吗?还是血清就可以?

A:直接血清就可以,?#35805;?#20154;源的20mg/ml的抗体


Q:我现在有几ml鼠血清,有igg抗体,需要纯化,然后需要用纯化的igg纯化抗原,并且最后抗体、抗原需要分别保存用于后续实验,需要的是我们哪个产品

A:1、先用Protein A纯化出抗体,预计就只要1ml左右的量,估计鼠抗浓度不高,1ml就足够了。纯化出抗体后单独保存。
   2、再将抗体与Protein A结合,用一种交联试剂与抗原交联在一起得到纯化抗原。具体的交联试剂需要您再去查查


Q:除了人IgG抗体,哪些动物哪些抗体曾做过实验?载量多少?

A:除了人IgG、我们还纯化过羊、小鼠、兔子的抗体。不同的动物,不用的亚型载量有区别。



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